ELISA实验

酶联免疫吸附测定（enzyme linked immunosorbent assay，简写ELISA），是指将可溶性的抗原或抗体结合到聚苯乙烯等固相载体上，利用抗原抗体结合专一性进行免疫反应的定性和定量检测方法。

实验原理

1）抗原或抗体能以物理性地吸附于固相载体表面，可能是蛋白表面间的疏水性部分相互吸附，并保持其免疫学活性；

2）抗原或抗体可通过共价键与酶连接形成酶结合物，而此种酶结合物仍能保持其免疫学和酶学活性；

3）酶结合物与相应抗原或抗体结合后，可根据加入底物的颜色反应来判定是否有免疫反应的存在，而且颜色反应的深浅是与标本中相应抗原或抗体的量正比例的，因此，可以按底物显色的程度显示试验结果。

实验方法

1. 直接法：将抗原固定于ELISA板上，然后用酶标抗体直检测抗原。

优点：实验步骤少，检测速度快，不需要用到二抗，避免了交叉反应。

缺点：实验背景会比较高，没有使用二抗，灵敏度较低；每种靶蛋白都需要准备能够与其特异性结合的一抗，实验不太灵活。

2. 间接法：间接法常用于检测抗体，将抗原固定于ELISA板上，随后分两步进行检测：首先加入检测抗体于抗原特异性结合，随后加入酶标二抗检测并利用底物显色。

优点：与直接ELISA相比，间接ELISA用到酶标二抗，具有更高的灵敏度，也需要更少的标记抗体，更经济，间接ELISA还提供了更大的灵活性，

缺点：存在交叉反应的可能性（酶标二抗直接与抗原结合），可能会增加背景，多了二抗孵育的步骤，实验周期延长。

3. 夹心法：常用于检测大分子抗原，被检测的抗原包被在两个抗体之间，其中一个抗体将抗原固定于载体上，即捕捉抗体，另一个则是检测抗体，此抗体可用酶标记后直接测定抗原的量，或不标记，再透过酶标记的二级抗体来测定抗原的量。

4. 竞争法：一种较少用到的ELISA检测机制，一般用于检测小分子抗原。当需要侦测无法获得两种以上单一性抗体的抗原或是不易得到足够的纯化抗体以固著于孔盘上时，使用竞争法ELISA，其主要优点在于可检测不纯的样品，且数据再现性高，但存在整体敏感性和专一性较差的问题。